Eppendorf FemtoJet - Handbuch (Seite 26)

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3 Bedienung und Arbeitstechnik
3.5 Die erste Injektion
Bereit stehen:
● Adhärente Zellen in einer Petrischale (evtl. auf CELLocates,
zur Beobachtung bestimmter Zellen nach der Injektion),
● Injektionsflüssigkeit (gereinigt, z.B. durch Zentrifugation),
● Femtotips

/ Femtotips

II, alternativ andere Kapillaren
● Microloader,
● 0,5 – 10 µl Pipette zur Aufnahme der Microloader,
● ein mit Femtotip

vorjustierter Universalkapillarenhalter
am Micromanipulator.
Befüllen des Femtotips
®
mit dem Microloader:
– Funktion 0 "Kapillarenwechsel" über anwählen. Injektions-
schlauch anschließen.
– Mit Microloader ca. 0,5 – 5,0 µl der zentrifugierten Injektionsflüssig-
keit aufnehmen, ohne dabei den Boden des Gefäßes zu berühren.
Mit dem Microloader den Femtotip
®
durch die hintere Öffnung befül-
len, dabei die Spitze ungefähr bis in die Mitte des Femtotips
®
einfüh-
ren und dort die Flüssigkeit abgeben.
– Femtotip ® senkrecht halten und die Schutzkappe durch Drehen lösen
und senkrecht fallen lassen.
– Femtotip
®
in den Kapillarenhalter schrauben.
– Funktion 0 über abschließen. Kompensationsdruck liegt an.
– Kapillare mit dem Micromanipulator in das Zellmedium (Petrischale)
bringen.
– Mit dem Mikroskop die Zellen fokussieren, Kapillare etwas oberhalb
der Zellen positionieren, aber nicht auf den Boden der Petrischale
aufsetzen. Kapillare fokusieren.
– Mit der Taste die Kapillare auf Durchgängigkeit prüfen. Entwe-
der wird ein Ausströmen sichtbar oder wird durch einen mitgeführten
Fluoreszenzfarbstoff sichtbar gemacht. Eventuell vorhandene
Luftbläschen werden in der Regel ausgeblasen.
– Mit den voreingestellten Parametern (z. B. p
i
~ 150 hPa, t
i
~ 0,5 s,
p
c
~ 50 hPa, entsprechend p
i
~ 2,18 PSI, t
i
~ 0,5 s, p
c
~ 0,73 PSI)
eine Probeinjektion durchführen. Visuelle Kontrolle der Injektion über
die Größenänderung der Zelle von ca. 5 % – 10 % oder über Fluores-
zenz. Bei Bedarf die Parameter p
i
oder/und t
i
anpassen.
03_Bedien.fm Seite 24 Mittwoch, 27. September 2006 4:40 16