Hoefer TE70X - Handbuch (Seite 25)

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5. Elektrotransfer Noten
• Führen Sie die Übertragung so bald wie
möglich nach der Elektrophorese zu Protein
Diffusion innerhalb des Gels zu minimieren.
• Gele gestapelt müssen alle die gleiche Größe
haben.
• Begrenzen Übertragungen zu zwei Stunden
oder weniger.
• Die empfohlene Methanol-Konzentration für
verschiedene Membran-Typen sind:
Membran-Typ Methanol %
Geladene Nylonmembran 0
Nitrocellulose 10 – 20
PVDF 10 – 20
• Verwenden Sie einen Puffer mit niedriger
Ionenstärke wie einer der beiden unten aufge-
führten Überhitzung zu vermeiden. Verwenden
Sie die CAPS-Puffer Tris, wenn nicht verwen-
det werden kann (z. B. Peptid-Sequenzierung)
werden. CAPS können Transfer wegen seiner
Wirkung auf die Ladung des Proteins (siehe
Matsudaira, 1987) zu verbessern.
Towbin Puffer
(25 mM Tris, 192 mM Glycin, 20% v/v Methanol,
pH 8,3, 1 Liter)
Tris (FW 121,1)
25 mM 3,0 g
Glycin (FW 75,07) 192 mM 14,4 g
SDS* (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 1,0 g
Man löst in 600 ml destilliertem Wasser.
In Methanol als erforderliche
† .
Bringen Sie auf 1 Liter mit destilliertem Wasser.
Verstellen Sie nicht den pH-Wert, der zwischen 8,2
bis 8,4 sein sollte.
Optional: Chill vor dem Gebrauch.
*Optional: Zugabe von SDS können Transfer Effizienz zu verbessern.
†
Je nach Membran-Typ ausgewählt (siehe Tabelle oben), Zugabe von
Methanol verbessern können Transfer-Ergebnisse.
Hinweis: Puffer mit Methanol
kann sich verschlechtern, wenn
für längere Zeit hinzuzufügen
Methanol nur vor der Übertragung
gespeichert.