Hoefer SE400 - Handbuch (Seite 19)

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2.2 Acrylamidgel Vorbereitungn
Tabelle 1. Ungefähre Monomerlösung Lautstärke für
einen einzelnen Gel erforderlich
Geldicke (mm)
Modell 0,75 1,00 1,5
SE400 15 ml 23 ml 30 ml
SE410 23 ml 34 ml 45 ml
2.2.1 Trenngele
1
Bereiten Sie die Monomerlösung und gießen Sie das
Gel. Bereiten Sie die benötigte Menge an Monomer-
Lösung, entlüften, und fügen Sie den Initiator und
Katalysator unmittelbar vor dem Gießen des Gels.
2
Pipettieren Sie die Lösung in einer Ecke des Sandwich,
wobei darauf geachtet, dass keine Luftblasen
einzuführen. Weiter unten finden Sie die passende
Lösung Ebene:
Nein Sammelgel (Continuous System). Füllen Lösung
bis knapp unterhalb der Oberkante der oberen
Plattenkante. Wenn Blasen gefangen sind, mit einer
Pipette oder Spritze entfernen. Einführung eines
Kamms (in einem leichten Winkel) in jedem Sandwich,
dabei nicht um Luftblasen unter den Zähnen zu fangen.
2-Gel-Sandwich. Pipettieren die Lösung in beiden
Sandwiches, Füllen jeder auf das gleiche Niveau
unterhalb des gezahnten Randes.
Stacking Gel. Füllen Lösung zu 3-4 cm unterhalb
der Oberkante der Glasplatte. Diese Höhe ermöglicht
einen 1 cm Sammelgel unter dem Brunnen. Gießen
Sie das Gel ein und bringen ein Overlay (siehe Schritt
3). Nachdem das Gel gesetzt wird, bereiten Sie das
Stacking-Gel, wie im nächsten Abschnitt beschrieben.
2-D Elektrophorese (diskontinuierliche System). Für
die zweite Dimension Trenngel, füllen Lösung ~1,0 cm
unterhalb des Kopfes der Glasplatte (lassen zusätzlichen
Platz für eine Stacking-Gel, falls erforderlich). Einem
Zentimeter ermöglicht ausreichend Platz für die erste
Dimension IPG Bandes oder des Schlauches und einer
Agarose-Gel-Dichtung. (Während der Übertragung,
kümmern uns um Lufteinschlüsse zwischen der Röhre
und Slab-Gel Gel zu vermeiden; das Rohr abzudichten
Gel in Ort mit Agarose in Elektrophoresepuffer.)
Hinweis: Anhang A auf Seite
29, listet Rezepte für die
Laemmli-Gel-System.