3 probenvorbereitung – Hoefer SE400 Benutzerhandbuch
Seite 23
•
p15
2.3 Probenvorbereitung
Die Menge der Probe geladen wird, hängt von
der Dicke des Gels, der Empfindlichkeit des
Nachweisverfahrens verwendet, und der Menge
der Probe in jedem Band zu erwarten. In einem
kontinuierlichen Puffer-System, sollte das Protein
Probe relativ konzentriert werden, da keine
Stacking-Gel verwendet wird. In einer diskon-
tinuierlichen Puffersystems, die Zone, in die jede
molekulare Spezies wandert durch die Stacking-
Gel ist zugespitzt, so daß die Probe braucht nicht
so konzentriert werden.
1
Bereiten Sie die Wells. Nehmen Sie den Kamm
durch sanftes Schütteln es einer Seite zur anderen
und dann gerade nach oben, um eine Beschädigung
der Wände gut. Spülen Sie die Vertiefungen mit
Elektrophoresepuffer zu unpolymerisierten Acrylamid
zu entfernen und dann abtropfen durch Invertieren
des Gel-Sandwich (oder Nachlauf). Füllen Sie jede gut
mit Elektrophorese-Puffer.
2
Probe vorbereiten. Erhöhen flüssigen Probe Dichte
mit 10% Glycerin oder Saccharose. Hinzufügen eines
Tracking-Farbstoff, wie Phenolrot, Bromphenolblau,
Pyronin oder Y.
Für die SDS-Protein-Gele verwenden 2X Behandlung
Puffer sowohl flüssige als auch trockene Proben in
einem Reagenzglas zu denaturieren
Um flüssigen Protein-Proben, fügen Sie einen
identischen Volumen von 2X Behandlung Puffer.
Um Protein-Proben trocknen, fügen gleichen Volumina
von 2X Behandlung Puffer und destilliertem Wasser
auf die gewünschte Konzentration.
Wärme das Rohr in kochendem Wasser für 90
Sekunden, dann erlauben, auf Raumtemperatur
abkühlen gelassen. Behandelte Proben können bei -40
bis -80 °C für zukünftige Auflagen gelagert werden.
Wärme Membranproteine bis 60 °C für 20 Minuten.
Nicht verwendete Probe bei 4 °C
Tabelle 2. Nun Volumen (µl)
pro 1 mm Tiefe für jeden
Kamm Größe
Kamm Dicke
(mm)
Anzahl der
Vertiefungen 0,75 1,0
1,5
10
6,2 8,3 12,4
12
5,8 7,7 11,5
15
4,3
5,7
8,6
20
3,1 4,1 6,2
28
2,1 2,7 4,1