Hoefer SUB Series - Handbuch (Seite 26)

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Unter Verwendung der
horizontalen Gelelektrophorese
Einheiten
Herstellung von Agarosegelen
Die Menge an Agarose, um eine bestimmte% Gel
muss errechnet werden kann, zum Beispiel ein
0,8%-Gel kann durch Lösen von 0,8 g Agarose
Pulver in 100 ml Laufpuffer durchgeführt werden.
Die Art der Laufpuffer sollten immer die gleiche sein
für das Gel wie die in dem Puffertank verwendet.
Die Agarose muss vollständig gelöst sein, bevor
das Gel richtig bilden können. Dies kann durch
Erhitzen mit wirbelnden in einem Wasserbad oder
Inkubator auf 70 °C oder durch Erhitzen auf einer
magnetischen Heizblock mit einem magnetischen
Rührstab eingefügt erreicht werden. Der Kolben
sollte immer abgedeckt, um die Verdampfung des
Puffers und eine höhere Konzentration Gels, das sich
zu verhindern. Diese Methoden kann länger dauern
als 1 Stunde für die Agarose vollständig aufzulösen.
Alternativ kann die Agarose in etwa 5-10 Minuten in
einem Mikrowellenofen gelöst werden. Die Agarose-
Lösung sollte abgedeckt werden, und die Mikrowelle
gesetzt zu niedrig. Die Agarose löst besser, wenn die
Mikrowellen periodisch gestoppt wird und die Lösung
verwirbelt. Vor dem Gießen sollte die Agarose-Lösung
für die ungelösten Agarose Kristalle, die die Mobilität
Eigenschaften der Gele beeinflussen kann geprüft
werden. Wenn diese vorhanden sind, sollten Agarose
löst fortgesetzt werden. Die Agarose-Lösung sollte
auf 50-60 °C gekühlt werden vor dem Gießen. Wenn
zu heiß einer Temperatur gegossen wird, das Gel mit
größerer Wahrscheinlichkeit zu lecken und der Kamm
kann verzerrt werden.
Agarosegel-Elektrophorese
DNA Mobilität
DNA-Fragmente als eine Größe von 1 kb oder
weniger getrennt mittels Agarose-Gelelektrophorese
werden. Für Fragmente kleiner als 0,1 kb sind
Polyacrylamidgelen besser geeignet.