Hoefer SE250 Benutzerhandbuch
Seite 17
3.4 Probenvorbereitung und Beladung
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Wenn Brunnen bereits vorhanden sind, fahren Sie mit
Schritt 2 fort.
Falls zutreffend, werfe den Stacking-Gel in der Einheit.
Berechnen Sie die Stacking-Gel Monomerlösung Volu-
men: den Abstand in cm von der Spitze des Trenngels
in die Nase in der Aluminiumoxidplatte. (Dies sollte
mindestens 2 cm-mehr sein, wenn die Probe in der
Tiefe gut ist ungewöhnlich hoch.) Multiplizieren Sie
diesen Abstand von der Gel-Breite (8,3 cm) und dem
Gel Dicke (cm). Dieses Produkt ist das erforderliche
Volumen in ml.
Entlüften Sammelgel Monomerlösung, fügen Katalysa-
tor und Initiator und dann gießen. Mit einer Pipette
auf die Lösung in einer Ecke der Platte liefern, wobei
darauf geachtet, keine Blasen zu fangen. Einfügen
eines Kamms (in einem kleinen Winkel um Luftein-
schlüsse zu verhindern) in die Sandwichstruktur, so
dass der Kamm Seiten auf die Distanzscheiben ruhen.
Überlagern jedes Gel mit einer dünnen Schicht
von Wasser-gesättigtem n-Butanol, Wasser oder
verdünnten Gel Puffer Gel Einwirkung von Sauerstoff
zu verhindern. Langsam liefern die Overlay-Lösung
aus einer Glas-Spritze mit einer 22-Gauge-Nadel
ausgestattet. Geben Sie die Lösung in der Nähe
des Abstandshalters an der Seite des Sandwich und
lassen Sie sie über die Oberfläche allein fließen.
Lassen Sie mindestens 1 Stunde für das Gel zu poly-
merisieren.
2
Bereiten Sie die Probe. Erhöhen flüssigen Probe
Dichte mit 10% Glycerin oder Saccharose. Fügen Sie
einen Tracking-Farbstoff wie Phenolrot oder Bromphe-
nolblau.
Für SDS-Protein-Gele verwenden 2X Behandlung
Puffer sowohl flüssige als auch trockene Proben
in einem Reagenzglas zu denaturieren. Um flüs-
sigen Protein-Lösungen, ein gleiches Volumen von
•
p9
Hinweis: Stacking-Gel-Auflösung
ist optimal, wenn kurz vor der
Elektrophorese gegossen.