Hoefer SE250 - Handbuch (Seite 25)

Anhang
Die folgenden Laemmli-System leicht zur
Verwendung mit dem Mini-vertikalen Einheiten
modifiziert. Die Laemmli-System ist die
häufigste Elektrophorese-Protokoll für die
SDS-denaturierte Proteine . Die führenden Ionen
in dieser diskontinuierlichen Puffersystems
Chlorid ist und das hintere Ionen Glycin ist.
Dementsprechend enthalten die Trenngel und die
Stacking-Gel Tris-Cl-Puffer (unterschiedlicher
Konzentration und pH), und die Elektrophorese-
Puffer enthält Tris-Glycin ist. Alle Puffer
enthalten 0,1% SDS.
Polyacrylamid-Gel-Zusammensetzung wird
durch zwei verschiedene Prozentsätze angegeben:
% T = total acrylamide = g (acryl + bis) × 100
100 mL
% C = crosslinker = g (bis) × 100
g (acryl + bis)
Die gesamte Prozent Acrylamid (% T) im
Trenngel, die 5 bis 20% liegen kann, bestimmt
die Porengröße. Üblicherweise verwendete
Menge an Vernetzungsmittel (% C) beträgt
2,6%. Im folgenden Beispiel-System ist das
Auflösungsvermögen Gel-Zusammensetzung
10% T, 2,6% C, die in einer mittleren
Porengröße ergibt. Das Sammelgel
Zusammensetzung 4% T, 2,6% C% T in
dem Stacking-Gel weniger ist, da eine größere
Porengröße erforderlich ist.
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p17
SE250 Ergebnisse:
Spur 1: SDS-6H, hohe MW
Standard-Mischung, Sigma™
Spur 2: SDS-7 Dalton Mark
VII-L™, Sigma (10 ul pro Bahn)
Gel
12% SDS-PAGE mit Coomassie-
Blue
Laufbedingungen
20 mA, eine Stunde