Rna-mobilität, Dna-nachweis – Hoefer HE99X Benutzerhandbuch
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RNA-Mobilität
RNA kann auch auf der Grundlage der Größe
getrennt werden. Um Anomalien durch sekun-
däre Struktur zu vermeiden, wird RNA entweder
vor oder während der Elektrophorese denatu-
riert. Z. B. Fragmente RNA zuvor mit Glyoxal
denaturiert und Dimethylsulfoxid kann auf neut-
ralem Agarosegelen getrennt werden, oder RNA
kann auf Agarosegelen mit Formaldehyd oder
Methylquecksilberhydroxid fraktioniert.
RNA-Proben erfordern in der Regel größere
Auflagen oder Puffer, die leicht erschöpft sind,
und dies erfordern Umlauf. Die Hoefer SUB20C
und SUB25C horizontale Einheiten sind für diese
Anwendung nicht das HE33 empfohlen.
DNA-Nachweis
DNA kann entweder durch die Fluoreszenz der
gebundenen Ethidiumbromid oder durch Auto-
radiographie von radioaktiv markierten DNA
nachgewiesen werden.
Ethidiumbromid (0,5 µg/ml) kann auf Laufpuffer,
um Fortschritt zu überwachen Probe hinzuge-
fügt werden, weil der Farbstoff der Fluoreszenz
unter einer UV-Lampe offenbart Band Lage. (Um
die Fortschritte zu überprüfen, schalten Sie die
Stromversorgung und entfernen Sie den Deckel
des Agarose-Einheit. Halten Sie einen tragbaren
UV-Lampe in der Nähe des laufenden Fach.
Setzen Sie den Deckel und schalten Sie das Gerät
wieder auf Elektrophorese wieder aufzunehmen.)
Alternativ kann nach Elektrophorese, färben Sie
das Gel in einer Ethidiumbromid-Lösung (0,5
µg/ml H
2
O) für 15 bis 60 Minuten und dann
sehen oder fotografieren Sie die Probe auf einem
UV-Transilluminator.
Um das Gel zu fotografieren, entweder stellen
die laufende Tablett auf dem Transillumi-
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Achtung! Ethidiumbromid ist
ein Mutagen bekannt. Tragen
Sie immer Handschuhe beim
Umgang.
Achtung! UV-Schutzbrille
tragen und schützen die Haut
bei der Anwendung eines
UV-Lichtquelle.
Hinweis: Ethidiumbromid
verlangsamt DNA-Migration von
rund 15%.
Hinweis: Minimieren Sie
die Färbung Zeit, um kleine
Nukleinsäure-Fragmente aus
Diffusion aus dem Gel zu
verhindern.
Hinweis: Ein Beispiel für
die RNA-Elektrophorese, zu
beziehen Molecular Cloning:
A Laboratory Manual by J.
Sambrook and D.W. Russell.