Hoefer HE33 - Handbuch (Seite 23)

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DNA-Nachweis
DNA kann entweder durch die Fluoreszenz der gebun-
denen Ethidiumbromid oder durch Autoradiographie
von radioaktiv markierten DNA nachgewiesen werden.
Ethidiumbromid (0,5 µg/ml) kann auf Laufpuffer, um
Fortschritt zu überwachen Probe hinzugefügt werden,
weil der Farbstoff der Fluoreszenz unter einer UV-
Lampe offenbart Band Lage. (Um die Fortschritte zu
überprüfen, schalten Sie die Stromversorgung und
entfernen Sie den Deckel des Agarose-Einheit. Halten
Sie einen tragbaren UV-Lampe in der Nähe des laufen-
den Fach. Setzen Sie den Deckel und schalten Sie das
Gerät wieder auf Elektrophorese wieder aufzunehmen.)
Alternativ kann nach Elektrophorese, färben Sie das
Gel in einer Ethidiumbromid-Lösung (0,5 µg/ml H
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O)
für 15 bis 60 Minuten und dann sehen oder fotografie-
ren Sie die Probe auf einem UV-Transilluminator.
Um das Gel zu fotografieren, entweder stellen die
laufende Tablett auf dem Transilluminator Oberfläche
oder schieben Sie das Gel auf die Oberfläche für
maximale Belichtung. (Die Laufzeit beträgt 95% Tray
transparent für 302-nm-Licht und 40% transparent
und 254 nm-Licht.) Sehen Sie sich die Probe unter
366-nm-UV-Licht oder verringerter Intensität 302-nm
UV-Licht zu photonicking reduzieren.
Um die Hintergrundfluoreszenz von ungebundenem
Ethidiumbromid zu reduzieren, kann das Gel durch
Eintauchen für 5 Minuten in 0,01 m MgCl
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, oder für
1 Stunde in 0,001 M MgSO
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entfärbt werden. Ent-
färbung macht es leichter, kleine Mengen (weniger
als 10 ng) DNA nachzuweisen. (Sambrook, Abschnitt
6.15).
Bibliographie
Ausubel, et al., (eds). Current Protocols in Molecular
Biology. Greene Publishing and Wiley-Interscience.
New York (1993).
Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T., Molecu-
lar Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Har-
bor Laboratory Press (1989).
Achtung! Ethidiumbromid ist
ein Mutagen bekannt. Tragen
Sie immer Handschuhe beim
Umgang.
Achtung! UV-Schutzbrille
tragen und schützen die Haut
bei der Anwendung eines
UV-Lichtquelle.
Hinweis: Ethidiumbromid
verlangsamt DNA-Migration von
rund 15%.
Hinweis: Minimieren Sie
die Färbung Zeit, um kleine
Nukleinsäure-Fragmente aus
Diffusion aus dem Gel zu
verhindern.