Eppendorf G0.5 µPlate - Handbuch (Seite 10)

Bedienung
Eppendorf
® μPlate G0.5
Deutsch (DE)
10
5 Bedienung
5.1 Anwendungen
5.1.1 Nukleinsäurequantifizierung
Für das Quantifizierungsverfahren in der μPlate G0.5 genügt schon ein Probenvolumen
von 2 μL, um akkurate Ergebnisse zu erzielen. Die Extinktion der Nukleinsäureproben
wird bei 260 nm gemessen. Die optische Schichtdicke der μPlate G0.5 beträgt 0,5 mm.
Zur Beurteilung der Reinheit der Nukleinsäure wird eine zusätzliche Messung bei 280 nm
durchgeführt, um gegebenenfalls in der Probe enthaltene Proteine anzuzeigen. Für reine
Nukleinsäuren ist ein 260/280-Verhältnis zwischen 1,8 und 1,9 akzeptabel. Ein Verhältnis
von < 1,8 kann anzeigen, dass die Probe Proteine oder andere Verunreinigungen enthält.
Ist dies der Fall, werden zusätzliche Aufreinigungsschritte empfohlen.
5.2 Messungen vorbereiten
5.2.1 Leerwert-Vorgang festlegen
Der Anwender kann zwischen zwei Optionen wählen: Ermittlung des mittleren Leerwerts
("Average Blanking") und Ermittlung der einzelnen Leerwerte ("Individual Blanking",
standardmäßig eingestellt).
5.2.2 Average Blanking
Zur Ermittlung des mittleren Leerwerts wählen Sie die Wells, für die der Leerwert
ermittelt werden soll. Ziehen Sie dazu in der Plattenvorschau einen Rahmen um die
entsprechenden Probenpositionen. Allgemein wird empfohlen, die Leerwertmessung mit
allen 16 Probenpositionen durchzuführen. Mindestens erforderlich sind jedoch zwei
Wells, um einen Mittelwert errechnen zu können, der dann für die Leerwertkorrektur aller
gemessenen Proben verwendet wird.
Um zuverlässige Messergebnisse zu gewährleisten, müssen die gemessenen
OD-Ergebnisse einen VK < 10% aufweisen (VK = Variationskoeffizient).
Abb. 5-1:Schaltfläche "Start Blanking"
Abb. 5-1: Schaltfläche "Start Blanking"