Eppendorf FemtoJet express - Handbuch (Seite 25)

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Bereit stehen:
• Adhärente Zellen in einer Petrischale,
• Injektionsflüssigkeit (gereinigt, z.B. durch Zentrifugation),
• Femtotips ® / Femtotips ® II, alternativ andere Kapillaren,
• Microloader,
• 0,5 – 10 µl Pipette zur Aufnahme der Microloader,
• ein mit Femtotip ® vorjustierter Universalkapillarenhalter am Mikromanipulator.
Befüllen des Femtotips ® mit dem Microloader:
– Funktion 0 "Kapillarenwechsel" über anwählen. Injektionsschlauch anschließen.
– Mit Microloader ca. 0,5 – 5,0 µl der zentrifugierten Injektionsflüssigkeit aufnehmen, ohne
dabei den Boden des Gefäßes zu berühren. Mit dem Microloader den Femtotip
®
durch die
hintere Öffnung befüllen, dabei die Spitze ungefähr bis in die Mitte des Femtotips
®
einführen und dort die Flüssigkeit abgeben.
– Femtotip
®
senkrecht halten und die Schutzkappe durch Drehen lösen und senkrecht fallen
lassen.
– Femtotip
®
in den Kapillarenhalter schrauben.
– Funktion 0 über abschließen. Kompensationsdruck liegt an.
– Kapillare mit dem Mikromanipulator in das Zellmedium (Petrischale) bringen.
– Mit dem Mikroskop die Zellen fokussieren, Kapillare etwas oberhalb der Zellen positionie-
ren, aber nicht auf den Boden der Petrischale aufsetzen. Kapillare fokusieren.
– Mit der Taste die Kapillare auf Durchgängigkeit prüfen. Entweder wird ein Ausströ-
men sichtbar oder wird durch einen mitgeführten Fluoreszenzfarbstoff sichtbar gemacht.
Eventuell vorhandene Luftbläschen werden in der Regel ausgeblasen.
– Mit den voreingestellten Parametern (z. B. p
i
~ 150 hPa, t
i
~ 0,5 s, p
c
~ 50 hPa,
entsprechend p
i
~ 2,18 PSI, t
i
~ 0,5 s, p
c
~ 0,73 PSI) eine Probeinjektion durchführen.
Visuelle Kontrolle der Injektion über die Größenänderung der Zelle von ca. 5 % – 10 % oder
über Fluoreszenz. Bei Bedarf die Parameter p
i
oder / und t
i
anpassen.
3.5 Die erste Injektion
3 Bedienung und Arbeitstechnik
Bedienung und Arbeitstechnik
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03_Bedienung.fm Seite 25 Freitag, 29. Juni 2007 2:41 14