Hoefer PR625 Immunoblot - Handbuch (Seite 10)

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Undichte –
Antikörper-
Lösung wurde auf
benachbarten
Kanälen bewegt. Trockene Bereiche der Membran
als Dochte für Flüssigkeit aus
den angrenzenden Gebieten zu
handeln. Immer vornässen die Membran vor dem Einbau
in das Gerät. Füllen Sie jeden Kanal, für den
Membran mit Puffer.
Membrane erstreckte sich nicht
auf die volle Länge des Kanals. Stellen Sie sicher, dass Membran auf die richtige
Größe geschnitten wird.
Flüssigkeit in überlasteten
Kanäle ergoss sich, wenn das
Gerät erschüttert wurde eine
Kontamination benachbarter
Kanäle. Nicht überfüllen Kanäle.
Wieder verwendet Abdichtung
Pads nicht richtig abdichten. Nicht wieder verwenden Abdichtung Pads, wie
sie während des Gebrauchs zu komprimieren.
Fach Inkubation. Betrachten Sie Ihre Blot Inkubation mit
sekundärem Antikörper in der ImmunoBlot und
nicht als Fach Inkubation. (Siehe Anhang A:.
Anm. 6)
Membran besteht aus Blockier-
ungsprotein abgestreift. Bitte achten Sie nicht auf den Blot von Blockier-
ungsprotein beim Waschen sie vor der Zugabe von
primären Antikörpern zu berauben. Bitte folgen
Sie den Anweisungen Ihres Western-Blot-Nach-
weis-Kit. Ein Muster-Protokoll ist in Anhang B.
Ungewaschene Kanäle
enthalten Antikörper, die das
Experiment kontaminiert. Reinigen Sie das Gerät nach jedem Gebrauch.
Für die Reinigung Tipps finden Sie im Abschnitt
Reinigen der ImmunoBlot, auf Seite 7.
Niedrige
Empfindlichkeit Wenn eine geringe Affinität oder
niedrigem Titer Antikörper bei
hoher Verdünnung (1:100.000
oder größer) verwendet werden,
kann eine gewisse Abnahme
der Signalintensität beobachtet
werden. Antikörper können sich
erschöpfen in dem kleinen Volu-
men des ImmunoBlot Kanal. Erhöhen Sie die Antikörperkonzentration 2-5 fache.
Erhöhen Sie die Lautstärke Antikörper-Lösung
pro Kanal. Um dies zu tun, legen Sie Standard
200 µl Pipettenspitzen in die beiden Eingangs-
Ports für jeden Kanal. Diese werden als Reservoir
für Probenvolumina größer als das Volumen des
Kanals selbst zu dienen, während Inkubation auf
der Wippe.
Spritzen Sie die Probe mit einem Antikörper, die
Spitze bleibt dann in der Eintrittsöffnung und
wird ein solches Reservoir.
Führen sekundären Antikörper-Inkubationen in
ein Fach ein. (Siehe Anhang A, Anm. 6).
Fehlerbehebung
Problem Mögliche Ursachen Empfehlungen