Hoefer PR625 Immunoblot Benutzerhandbuch
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Anhang B: Erkennung anhand
der ECL-Western-Blot-
Detection-Systeme
Hoefer empfiehlt, Markierung und Detektion auf
Blots gemäß den Anweisungen in Ihrem West-
ern-Blot-Kennzeichnung und Nachweis-Kit zur
Verfügung gestellt durchzuführen. Unten ist ein
allgemeines Protokoll auf dem GE Healthcare
(früher Amersham Biosciences) ECL Western
Blotting Detection Kit basiert.
Es gibt mehrere ECL-Western-Blot-Nachweis-
Systemen verfügbar.
Die folgenden allgemeinen Protokoll wird
vorgeschlagen:
1
Nach der Elektrophorese und Transfer der
getrennten Proteine auf Nitrocellulose oder PVDF
(niedrig fluoreszierenden Hybond LFP für höchste
Empfindlichkeit)-Membran, blockiert unspezifische
Seiten mit einem geeigneten Blocking-Lösung.
2
Sperrung wird durch zwei schnelle Waschungen in
PBS/0.1% Tween (PBS-T) folgten.
3
Tauchen und inkubieren Sie die Membran mit einer
Antigen-spezifischen primären Antikörper von optimi-
erten Konzentration.
4
Entfernen Sie die Membran mit zwei schnellen
Wäschen von PBS-T, gefolgt von 2 mehr Wäschen
(2 × 5 min mit Schaukeln).
5
Inkubieren der Membran mit einem optimierten
Konzentration des konjugierten sekundären Antikörper.