Anhang a: technische hinweise – Hoefer PR625 Immunoblot Benutzerhandbuch
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Anhang A: Technische
Hinweise
Hinweis 1: Blockierung der Membran
Die Membranen sollten immer vor der Montage
im Immunoblot blockiert werden. Bitte folgen
Sie den Anweisungen für die Blockierung in
Ihrer Western-Blot-Nachweis-Kit zur Verfü-
gung gestellt.
Im Allgemeinen werden 5% Nicht-Fett-Trock-
enmilch oder 5% BSA als Blockierungsmittel
verwendet.
Blockieren mit Tween-20 oder anderen Deter-
genzien allein wird nicht empfohlen, da es
langsam laterale Diffusion von Proteinen durch
die Nitrozellulosemembran verursachen können.
Wir empfehlen, den ersten Schritt des Blocki-
erens in einer Lösung mit einem Protein (z. B.
5% BSA) ohne Reinigungsmittel. Längerer Wasc-
hungen mit Lösungen, die kein Protein vor der
Montage der Membran in der ImmunoBlot.
In vielen Fällen kann ausreichende Blockier-
ung durch Inkubation mit PBS/10% neuge-
borenen Kälbern serum/0.1% Tween-20 für
mindestens eine Stunde bei Raumtemperatur
erreicht werden. Allerdings unterscheiden sich
blockierenden Substanzen in ihrer Wirksamkeit
abhängig von Umständen. Für Blots von ganzen
Zelllysaten, Blockieren mit 50 bis 100% Serum
sehr wirksam bei der Verringerung der unspezi-
fischen Bindung.