Bereiten sie die acrylamid-lösung – Hoefer SE900 Benutzerhandbuch
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Bereiten Sie die Acrylamid-Lösung
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Siehe Anhang A für SDS-PAGE-Rezepte. Zum Gießen sechs
SE9102-1-1.0 Gele, wird 400 ml benötigt.
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Die Luft aus dem Gel-Lösung für 5 Minuten. In der (Initiator) 10%
w/v APS und der (Katalysator) 10% v/v TEMED* unmittelbar vor dem
Gießen der Gele. Gießen Sie das Gel-Lösung in den Kabelkanal an der
Rückseite des Zaubernden. Die Lösung wird fließen den Channel aus
und füllen die casssettes von unten (Abb. 15).
* Die TEMED auf 10% für eine bessere Verteilung während des Misch-
ens der Gel-Lösung verdünnt.
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Füllen Sie die Lösung als einen langsamen, kontinuierlichen Strom.
Versuchen, den Eintrag von Luftblasen in die Strömung zu minimieren.
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Füllen Lösung von 0,5-1 cm unterhalb des Kopfes der Glasplatte, um
Platz für die IPG-Streifen und einem Agarose-Dichtung zu ermöglichen.
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Überlagern jedes Gel mit einer dünnen Schicht von Wasser-gesättigtem
n-Butanol oder verdünnten Gel Puffer, um den besten Fläche an der
Oberseite des Gels zu erhalten. Langsam gilt das Overlay in der Nähe
der Gel-Oberfläche von einer Seite, wobei darauf zu achten, damit eine
Vermischung. Lassen Sie das Overlay über die Oberfläche ohne fremde
Hilfe (Abb. 16) fließen.
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Lassen Sie das Gel etwa eine Stunde polymerisieren.
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Entfernen Sie das Overlay durch Spülen der Spitze des Gel mehrmals
mit destilliertem Wasser. Verwenden Sie verdünnte Gelpuffer als letzte
Spülung.
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Optional-Speicherung: Die zweite Dimension Gele können vorüberge-
hend in den Zaubernden gespeichert werden.
Die zweite Dimension Gele können auch aus der Gießmaschine
entfernt werden und gespeichert 1-2 Tage in Gelpuffer vor der
Verwendung unter Wasser. Es besteht die Gefahr, dass bei längerer
Lagerung, der Gele abosrb Wasser, und die Kassette teilweise öffnet,
was zu schiefen Farbstoff Fronten.
Abb. 15. Gießen der Lösung in einer
langsamen kontinuierlichen Strom.
Abb. 16. Die Anwendung Overlay.
Hinweis: Eine Stacking-Gel kann bei Bedarf
verwendet werden, ist aber nicht notwendig.
Hinweis: Es ist notwendig, um Butanol
Overlays vor dem Speichern der Gele in den
Zaubernden zu entfernen. Verlassen Butanol
in der Zaubernde kann Bleaching und
Sprödigkeit des Acryl-führen.
Achtung! Acrylamid ist ein Nervengift.
Extreme Vorsicht ist geboten, wenn Hand-
habung und Zubereitung von Acrylamid-
Lösungen werden.