Hoefer SE900 - Handbuch (Seite 33)

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9. 1% Agarose in 1X Elektrophoresepuffer
(100 ml)
In einem 500 ml Kolben hinzu:
Agarose
1 g
10X Elektrophoresepuffer (Lösung #8) 10 ml
Deionisiertes H
2
O 90 ml
Bromphenolblau 3 mg
Vorsichtig schwenken, zu suspendieren Agarose.
Wärme bei niedriger Leistung in der Mikrowelle bis die Agarose vollständig
gelöst ist.
Teilen Sie sich in ~1,5 ml Kunststoff-Schraubverschluss Röhrchen.
Shop in Aliquots bei 4 °C
10. Gradient Gel Casting Displacement-Lösung
(50% Glycerin in 0,375 mM TrisCl 8.8, 0,1% SDS, 200 ml)
100 ml Glycerin
1.5M TrisCl pH 8,8 (Lösung #2) 50 ml
Deionisiertes H
2
O 50 ml
Bromphenolblau 3 mg
Gut mischen.
11. SDS Äquilibrierungspuffer Lösung
Diese Lösung wird nach IEF, und vor dem zweiten Dimension PAGE verwen-
det. Die IPG-Streifen werden in überschüssige Lösung eingetaucht, um
den pH-Wert des Streifens Puffer zu erhöhen, so dass es für PAGE und zur
Beschichtung der Proteine in der SDS gleichmäßig, so dass sie korrekt migri-
ert in der zweiten Dimension Gel.
Bereitet 200 ml
(6 M Harnstoff, 75 mM Tris-HCl pH 8,8, 29,3% Glycerin, 2% SDS, 0,002%
Bromphenolblau)
Endkonzentration Betrag
Urea (FW 60,06) 6 m 72,1 g
1,5 Tris-HCl, pH 8,8 Stammlösung 75 mM 10,0 ml
Glycerin (87% w/w) 29,3% (v/v) 69 ml
SDS (FW 288,38) 2% (w/v) 4,0 g
Bromphenolblau 0,002% (w/v) 4 mg
Deionisiertes H
2
O auf 200 ml
Aliquot in 30 ml Aliquots und Lagerung bei -20 °C eingefroren werden.
24 cm IPG erfordern 5 -10 ml pro Streifen pro Äquilibrierungsschritt.
Kürzeren Streifen können mit entsprechend weniger Volumen pro Äquilibrier-
ungen Schritt.
Achtung! SDS kann dazu führen, die Lösung
zu sieden über so vorsichtig zu Heiz-und
Überkochen zu verhindern.
Hinweis: IPG-Streifen sollte äquilibriert
kurz vor der zweiten dimensin PAGE.
Kein Gleichgewicht der IPG-Streifen vor
der Lagerung bei -20 °C.