Hoefer SE900 - Handbuch (Seite 19)

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Gradientengele
Linear Gradientengele können gegossen über ein optional erhältliches,
die Hoefer SG500 Gradient Maker werden. Die SG500 vermischt
geringen Anteil und hohen Prozentsatz Gel-Lösungen, die in den
Anschluss an der Unterseite der mehreren Gelgießstand Verwendung
einer peristaltischen Pumpe gepumpt werden.
Gießen eines linearen Farbverlaufs Gel
1 Zusammenbauen mehrere Gelgießstand wie auf Seite 11, mit den
folgenden zwei Ausnahmen beschrieben:
• Stecken Sie nicht den dreieckigen Gummidichtung am unteren Rand
des Gels Zaubernden.
• Entfernen Sie die Schutzkappe von der Unterseite Einlassöffnung.
2 Befestigen Sie ein Ende Laborqualität Schlauch mit dem SG500
Auslassöffnung. Stecken Sie den Schlauch durch eine Schlauchpumpe,
und befestigen Sie das andere Ende an den Einlass des SE915 mehrere
Gelgießstand Faceplate.
3 Berechnen Sie das Volumen der Monomer-Lösung benötigt. Teilen Sie
das Gesamtvolumen in der Mitte und bereiten dieses Volumen sowohl
der höheren und niedrigeren Prozentsatz Acrylamid-Lösungen.
4 Optional: Einstellen der höherprozentigen Acrylamid-Lösung zu
15% (w/v) Saccharose oder bis zu 25% (v/v) Glycerin Schichten zu
verbessern.
5 Gießen Sie die höheren Prozentsatz, oder schwer, Acrylamid-Lösung
in die Kammer SG500 aus der Steckdose am weitesten entfernt.
Öffnen Sie den Wasserhahn gerade lang genug, um Luft zwischen den
Kammern und schließen Sie dann zu verdrängen.
6 Gießen Sie den niedrigeren Prozentsatz, oder leichter, Acrylamid-Lösung
in die Mischkammer, wobei die Kammer mit dem SG500 Steckdose.
7 Stellen Sie einen Rührstab in die Mischkammer. Setzen Sie den Gradi-
enten Maker auf einen Magnetrührer, und beginnen Rühren bei einer
Geschwindigkeit, die gut vermischt sich aber nicht vorstellen Blasen in
die Lösung.
8 Schalten Sie die Schlauchpumpe auf eine geringe Lautstärke, und
öffnen Sie den Hahn zwischen den beiden Kammern SG500.
9 Die Gel-Lösung sollte langsam Schicht in dem dreieckigen Bereich an
der Unterseite der mehreren Gel Nachlauf und füllen die Kassetten glei-
chmäßig von unten nach oben.
10 Nachdem fast alle Lösung Verlassen des Gradienten maker Pause die
Pumpe vorübergehend, und füllen Sie den Gradienten Maker mit
~200 ml der Verschiebung Lösung. Starten Sie die Pumpe und pumpen
Sie die Lösung durch den Schlauch und zwang die Acrylamid-Lösungen
bis hin in die Gel-Kassetten, bis die gewünschte Höhe erreicht ist. Stop-
pen Sie die Pumpe.
11 Überlagern Gel mit 1 ml Wasser gesättigtem n-Butanol oder verdünnte
Gel Puffer, um die besten Top-Gel-Oberfläche zu bekommen. Langsam
liefern die Overlay-Lösung auf einer Seite, minimiert Mischen und damit
die Überlagerung über die obere Oberfläche allein fließen.
12 Lassen Sie die Gele für mindestens eine Stunde polymerisieren. Nach
der Polymerisation, gießen Sie die integrierte numerische Tastatur und
spülen Sie das Gel Oberfläche mehrmals mit destilliertem Wasser.
13 Bereiten Sie das Sammelgel Monomerlösung. Gießen Sie das Stacking-
Gel auf dem Trenngel. Lassen Sie mindestens 1 Stunde für das Stack-
ing-Gel zu polymerisieren.
Hinweis: Es ist eine gute Idee, mit Wasser
und die Schlauchpumpe üben, um empirisch
die Volumina und die Durchflussmengen, um
gute Gradientengele gegossen.
Hinweis: Die Verschiebung Lösung
erforderlich ist. Die Steigung wird nicht
korrekt bilden, ohne das Acrylamid im
Inneren der Kassetten. Es hilft auch dabei,
Acrylamid aus der Polymerisation in der
Rohrleitung und der Unterseite der Rolle,
vereinfacht Reinigung. Die Verschiebung
Lösung darf nicht in den Boden der
Kassetten.
Hinweis: Vermeiden Sie, dass Luftblasen in
den Pumpenschlauch, Luftblasen werden mit
der richtigen Gradientenbildung stören.