Hoefer SE640 - Handbuch (Seite 28)

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Die Trennung der Probe
Elektrophorese-Parameter für den
diskontinuierlichen Polyacrylamidgelen
Gele können entweder bei konstantem Strom
oder konstanter Spannung Einstellungen ausge-
führt werden. Ein konstanter Strom Einstellung
wird traditionell mit einem diskontinuierlichen
Puffersystem verwendet, so dass die Rate der
elektrophoretischen Wanderung bleibt während
der Laufzeit. Unter diesen Bedingungen Span-
nung zunimmt, wenn der Lauf verläuft. Eine
niedrigere aktuelle Einstellung wird für höhere
Auflösung empfohlen. Die optimale aktuellen
Niveau muss empirisch ermittelt werden; die
Hauptfaktoren, die ausgeglichen werden müssen,
sind die Gel-Konzentration und Geschwindig-
keit der Migration, und die daraus resultierende
Joulesche Erwärmung und Band Verzerrung. In
Tabelle 2 sind Ausgangspunkt Richtlinien und
Anpassungen für Geldicke, Anzahl der Gele, der
und Migration.
Strom
Übliche wirkt auf den gesamten Querschnittsfläche
aller Gele, da die Gele, die parallel in der elektrischen
Schaltung verbunden sind. So ist die aktuelle
Einstellung für ein Gel ist durch die Anzahl der Gele
der gleichen Gel Dicke aufweist, die gleichzeitig
betrieben werden, multipliziert werden. Für ein Gel
1,5 mm dick, empfehlen wir einen Ausgangspunkt
aktuelle Einstellung von 25 mA. (Zwei 1,5 mm Gele
= 50 mA.)
Spannung
Die Ausgangsspannung für eine 1,5 mm Slab-Gel mit
einem Netzteil, auf 25 mA beträgt gewöhnlich 80 bis
90 V (mit dem SE 600 mit einem Laemmli-Puffer für
diskontinuierliche SDS-Gelen). Die Endspannung kann
typischerweise 220 bis 400 V betragen, je nach der
Länge des Gels. (Siehe Tabelle 2).
Hinweis: Alle Modelle der
Serie SE600 benutzen 18-cm
breiten Platten. Das Gel Dicke
bestimmt den Querschnitt
(und Strombedarf). Die Länge
der Platte bestimmt die
Laufzeit.
Tabelle 2: Laemmli-
Puffer-System Ausgangspunkt
Richtlinien
Geldicke* 1,5 mm
Strom pro Gel † 25 mA
Konstant-stromquelle
Anlaufspannung ‡ 80 – 90 V
Finale Spannung 220 – 250 V
* Dicker oder dünner Gele benötigen sie propor-
tional mehr oder weniger Strom. Zum Beispiel
erfordert eine 0,75 mm Gel, das halb so dick
wie ein 1,5 mm-Gel ist, halb so viel Strom, oder
12,5 mA.
† Der Strom muss durch die Anzahl der Gele zu
multiplizieren. Zum Beispiel, wenn zwei Club-
Sandwiches installiert sind, benötigen die vier
Gele viermal so viel Strom. Der Strom kann für
eine schnellere Läufe erhöht werden, wenn eine
aktive Kühlung verwendet wird, und es kann für
langsamere Nacht läuft verringert werden.
‡ Bei 25 mA pro Gel.