Hoefer SE400 Benutzerhandbuch
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Ungewöhnlich
langsam (oder
schnell) laufen
Aktuelle Leckage
um Gel
Auf Lecks überprüfen, alle Platten und Abstandshalter
müssen fluchten und frei von Fett und Risse.
Probe oder die
Aufbereitung des
Reagenz
Wenn die erforderliche pH-Wert einer Lösung ist
überschritten, nicht zurück-titriert. Entsorgen Sie und
bereiten frischen Puffer.
Prüfen Rezepte, Gel-Konzentrationen und Puffer verdünnt.
(Zum Beispiel, verwenden Sie nicht Tris-HCl anstelle von
Tris-Puffer für Laemmli Tank.)
Verringern Sie die Salzkonzentration von Proben.
Reagenz-Qualität
Entsorgen älteren Acrylamid-Lösungen und verwenden Sie
nur Aktien von höchster Qualität. Verwenden Sie nur frisch
deionisiert Harnstoff.
Spannung oder
Strom-Einstellungen
So erhöhen oder verringern Sie die Geschwindigkeit der
Migration, Anpassung der Spannung oder Strom um
25–50%.
Bands sind schief
oder verzerrt
Unvollständige
Gelzubereitung und
Polymerisation
Degas das Stacking-Gel-Lösung und Vermeidung von
Luftblasen unter der Kammzähne.
Unregelmäßige
Schnittstelle
zwischen Stapeln
und läuft Gele
Überlagern der Trenngel mit wassergesättigtem Butanol vor
Beginn der Polymerisation, zur Vermeidung der Bildung einer
unebenen Oberfläche Gel.
Probenvorbereitung
Dialysieren oder Entsalzung der Probe.
Stained Probe sammelt:
In der Nähe der
Puffer vor
Gel-Konzentration
Moleküle werden nicht ausreichend durch das Trenngel
Porengröße eingeschränkt: Erhöhung der% T.
Degradierung
Proteine abgebaut werden kann durch endogene Proteasen:
benutzen Protease-Inhibitoren bei der Isolierung Schritt.
Im oberen
Bereich des
Gels, wenn der
Puffer vor hat
die Talsohle
erreicht
Gel-Konzentration
Das Gel Porengröße ist zu klein:% verringern Sie den T des
Auflösungsvermögens (oder Stapeln) Gel.
Niederschlag
Das Protein wurde ausgefällt. Erhitzen Sie die Probe bei einer
niedrigeren Temperatur (70 °C oder weniger) für 1–2 min.
Auf der Ober-
seite und Unter-
seite des Gels
Gel-Konzentration
Der Molekulargewichtsbereich der Probe erfordert eine
Acrylamid-Konzentrationsgradienten, die gesamte Palette von
Größen-Protein zu lösen.
problem
verursachen
abhilfe