Hoefer SE400 - Handbuch (Seite 44)

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Gel Rezepte
Die Laemmli-Gel Rezepte sind für 30 ml einer einzigen Konzentration Lösung (genug für
eine 1,5-mm-18 × 16 cm Gel). Tabellarische sind Zutaten und Mengen für die relativ
großen Poren Gele (7,5 bis 10% T-Bereich) sowie kleineren Poren Gele (12,5 bis 15%
T-Bereich). Eine 4% Sammelgel ist weit verbreitet. Die linearen Gradienten Rezept ist für
100 ml Lösung. Das Gesamtvolumen ist abhängig von der Anzahl der Gele Besetzung und
Geldicke allmählich nach Bedarf. Alle Gele werden mit 2,6% C vernetzt
Tabelle 5. Laemmli-Gel Rezepte (pro 30 ml Trenngele Lösung, 5 ml Sammelgel-Lösung)
Trenngel Sammelgel
7,5% 10% 12,5% 15% 4%
Acrylamid Lager (Lösung #1) 7,5 ml 10 ml 12,5 ml 15 ml 0,67 ml
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Lösung #2) 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Lösung #3) 1,25 ml
10% SDS (Lösung #4) 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,05 ml
Deionisiertes H
2
O 14,6 ml 12,1 ml 9,6 ml 7,1 ml 3,00 ml
10% APS (Lösung #5) 150 µl 150 µl 150 µl 150 µl 25 µl
TEMED 10 µl 10 µl 10 µl 10 µl 2,5 µl
Endgültiges Volumen 30,0 30,0 ml 30,0 ml 30,0 ml 5,0 ml
Für lineare Gradientengele, verwenden Sie gleiche Volumina von niedrigen und hohen%%
Acrylamid-Lösungen. Weniger APS zugegeben, um die Polymerisation zu verlängern, und
noch weniger auf den höheren%-T-Lösung hinzugefügt, um die Polymerisation von oben
nach unten auftreten. Nach unseren Erfahrungen mit den Konzentrationen in der 10-20%
Steigung Beispiel unten, können zehn Gel-Sandwiches in einer Mehrfach-Gel Zaubernden
mit einer Flussrate von 5-10 ml / min gegossen werden.
Tabelle 6. Lineare Gradienten-Gel-Rezepte (pro 100 ml Lösung)
10% T 20% T
Acrylamid Lager (Lösung #1) 33,30 ml 66,70 ml
Saccharose — 15,00 g
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Lösung #2) 25,00 ml 25,00 ml
10% SDS (Lösung #4) 1,00 ml 1,00 ml
Deionisiertes H
2
O to 100,00 ml to 100,00 ml
10% APS (Lösung #5) 0,300 ml 0,060 ml
TEMED 0,036 ml 0,036 ml