Hoefer SE400 - Handbuch (Seite 39)

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6. Trenngel Overlay
(0,375 M TrisCl, 0,1% SDS, pH 8,8, 100 ml)
1,5 M Tris-Cl, pH 8,8 (Lösung #2) 0,375 M 25,0 ml
10% SDS (Lösung #4) 3,5 mm 1,0 ml
Deionisiertes H
2
O zu 100,0 ml
Speichern Sie bis zu 3 Monate bei 4 °C im Dunkeln.
—oder—
Wasser gesättigtem n-Butanol
Shake n-Butanol und entionisiertes in einem
Scheidetrichter H2O. Entfernen Sie die wässrige
(untere) Phase. Wiederholen Sie diesen Vorgang
mehrmals. Verwenden Sie die obere Phase.
—oder—
Wenn eine Überlagerung stört das bevorzugte
Protokoll, isolieren des Gels von Luftsauerstoff, indem
eine präparative Kamm oder die Lösung Gelbildners
auf dem Gel.
7. 2X Probenbehandlung Puffer
(0,125 M TrisCl, 4% SDS, 20% Glycerin,
0,2 mM DTT*, pH 6,8, 10 ml)
0,5 M Tris Cl, pH 6,8 (Lösung #3) 0,125 M 2,5 ml
10% SDS, 0,35 M (Lösung #4) 0,14 M 4,0 ml
Glycerin (FW 92,09) 20% v/v 2,0 ml
Dithiothreitol (DTT) (FW 154,2) 0,2 mM 0,31 g
Bromphenolblau(FW 691,9) 0,3 mM 2,0 mg
Deionisiertes H
2
O zu 10,0 ml
* oder 2-mercaptoethanol (FW 78,13) 2% v/v 0,2 ml
Teilen Sie sich in 1,0 ml Aliquots und lagern bei -40 °C bis
-80 °C für bis zu 6 Monaten.
—oder—
6X Probenbehandlung Puffer
(0,35 M TrisCl, 10% SDS, 30% Glycerin, 9,3% DTT,
pH 6,8, ~10 ml)
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Lösung #3) 0,35 M 7,0 ml
SDS (FW 288,4) 0,35 M 1,0 g
Glycerin (FW 92,09) 30% v/v 3,0 ml
DTT (FW 154,2) 0,6 M 0,93 g
Bromphenolblau (FW 691,9) 0,175 mm 1,2 mg
Teilen Sie sich in 1,0 ml Aliquots und lagern bei -70 °C.