Hoefer SE600 - Handbuch (Seite 23)

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Bereiten Sie die Monomer-Lösung
Berechnen Sie das Volumen der Monomer-Lösung
benötigt. Teilen Sie das Gesamtvolumen in der Mitte
und bereiten dieses Volumen sowohl der höheren und
niedrigeren Prozentsatz Acrylamid-Lösungen.
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Gießen der “kleine” Lösung in die Vorratskammer (die
Kammer am weitesten vom Auslass). Öffnen Sie den
Hahn zwischen den Kammern lange genug, um die
Luft zu verdrängen und dann zu schließen. Gießen Sie
den “schweren”-Lösung in die Mischkammer und legen
Sie einen Rührstab in diese Kammer. Setzen Sie den
Gradienten Maker auf einem Magnetrührer und beginnen
Rühren bei einer Geschwindigkeit, die gut vermischt sich
aber nicht vorstellen Blasen in die Lösung.
5
Mischen Sie den Gradienten zu pumpen und die Lösung
in den Sandwich-
Während die Lösung wird unter Rühren, Pumpen
beginnen aus der Mischkammer und öffnen Sie den
Hahn auf die Vorratskammer. Heben Sie die Kanüle
als Flüssigkeit in den Sandwich, halten Sie die Spitze
an der Gel-Oberfläche. Bereiten Sie mehr Gele je nach
Bedarf.
6
Überlagern Gel mit einer dünnen Schicht aus
wassergesättigtem Butanol, Wasser oder verdünnten
Gel Puffer Gel Einwirkung von Sauerstoff zu
verhindern. Langsam liefern die Overlay-Lösung
aus einer Glas-Spritze mit einer 22-Gauge-Nadel
ausgestattet. Geben Sie die Lösung in der Nähe der
Abstandshalter an einer Seite des Sandwich und
lassen Sie sie über die Oberfläche allein fließen.
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Lassen Sie die Gele für mindestens 1 h
polymerisieren. Nach der Polymerisation, gießen Sie
die integrierte numerische Tastatur und spülen Sie das
Gel Oberfläche mehrmals mit destilliertem Wasser.
Optional: Einstellen der
höherprozentigen Acrylamid-
Lösung zu 15% (w / v)
Saccharose oder 25% (v /
v) Glycerin Schichten zu
verbessern.