Probenvorbereitung und loading – Hoefer SE600 Benutzerhandbuch
Seite 24
•
p16
8
Bereiten Sie die Stapel-Gel-Monomer-Lösung, Gießen
der Stacking-Gel, und führen einen Kamm (in einem
leichten Winkel) in die Sandwichstruktur, wobei
darauf geachtet, keine Luft zwischen den Zähnen zu
fangen. Lassen Sie mindestens 1 h für das Gel zu
polymerisieren.
Probenvorbereitung und Loading
Die Probe kann entweder geladen werden,
während das Sandwich in der Nachlauf oder
nach dem oberen Pufferkammer befestigt
ist. Beim Laden von Proben während der
Verwendung Teilerplatten, müssen die Proben
ohne die obere Pufferkammer an Ort und Stelle
geladen werden.
Die Menge der Probe geladen wird, hängt
von der Dicke des Gels, der Empfindlichkeit
des Nachweisverfahrens verwendet, und der
Menge der Probe in jedem Band zu erwarten.
In einem kontinuierlichen Puffer-System, sollte
das Protein Probe relativ konzentriert werden,
da keine Stacking-Gel verwendet wird. In einer
diskontinuierlichen Puffersystems, die Zone, in
die jede molekulare Spezies wandert durch die
Stacking-Gel ist zugespitzt, so daß die Probe
braucht nicht so konzentriert werden.
1
Bereiten Sie die Wells
Nehmen Sie den Kamm durch sanftes Schütteln
es einer Seite zur anderen und dann gerade nach
oben, um eine Beschädigung der Wände gut.
Spülen Sie jede Kavität mit destilliertem Wasser auf
unpolymerisierten Acrylamid zu entfernen und dann
abtropfen durch Invertieren des Gel-Sandwich (oder
Nachlauf). Füllen Sie jede gut mit Elektrophorese-
Puffer.
Hinweis: Die mit Coomassie
Blue™ ist es möglich, 1 pg
Protein in einem einzigen
Band zu erkennen. Mit
den empfindlicheren Silber
Flecken, ist es möglich,
weniger als 10 ng Protein
nachzuweisen.