BINDER C 150 - Handbuch (Seite 59)

C 150 (E2) 12/2012 Seite 59/89
14. Vermeidung mikrobieller Kontamination
Die wichtigsten mikrobiologischen Kontaminationen in Zell- und Gewebekulturen werden durch Bakterien,
Pilze, Hefen, Mykoplasmen und Viren verursacht. Dieses Kapitel gibt einen Überblick über potentielle
Kontaminationsquellen und über Vorkehrungen und Gegenmaßnahmen.
14.1 Zellen und Medien
Primärkulturen vom Originalgewebe: Überwachung und Routinetesten der Kulturen.
Zellen / Zelllinien unbekannter Herkunft oder von Zellbanken: Nur Zellen bekannter und geprüfter Her-
kunft verwenden. Überwachung und Routinetesten neuer Kulturen.
Medien und Seren: Nur Seren bekannter und geprüfter Herkunft verwenden (Mykoplasmen freie Se-
ren, z.B. UV oder γ bestrahlt).
Virussuspensionen, Antikörper-Lösungen etc.: Nur Substanzen bekannter und geprüfter Herkunft ver-
wenden.
Laborgeräte, Medien, Reagenzien, die in Kontakt mit möglicherweise kontaminierten Kulturen waren,
sterilisieren / autoklavieren / entsorgen.
Antibiotikaeinsatz im Zellkulturmedium kann Entdecken von Bakterien verhindern: Antibiotika gezielt
und sparsam einsetzen.
14.2 Laborausstattung und Umgebung des CO
2
-Inkubators
Kontaminationsquellen im Zellkulturlabor sind Keime aus der Raumluft, Laborgeräte, bauliche Gegeben-
heiten und das Laborpersonal.
Pipetten und Instrumente nach dem Autoklavieren steril aufbewahren.
Sterile Werkbank (Laminar Flow Bench): Möglichst wenige Gegenstände außer Absauger und Bren-
ner, Arbeitsmaterialien leicht erreichbar und getrennt voneinander positionieren, Desinfektion der
Oberfläche mit Alkohollösung vor und nach Benutzung, Reinigung unterhalb der Werkbank, regelmä-
ßige Sterilitätstests der Filter.
Regelmäßige Reinigung / Desinfektion von Laborgeräten wie Zentrifuge, Mikroskop, Wasserbad,
Kühlschrank, sowie des Telefons.
Keine Aufstellung von Geräten auf dem Boden.
Raue oder feuchte Wände sind ungeeignet.
Undichte Türen und Fenster abdichten.
Klimaanlage mit speziellen Filtern ausstatten.
Reduzierung der Anzahl der Personen und deren Bewegung im Labor, verursacht durch unspezifische
Anwendungen und Entfernung zu benötigten Geräten, durch kurze Wege und gute Organisation. Die
Aufstellung des CO
2
-Inkubators nahe der sterilen Werkbank ist sinnvoll.
Regelmäßige mikrobiologische Überwachung des Zellkulturlabors.
14.3 Arbeiten und Verhaltensweisen im Labor
Kontaminationsquellen bestehen durch das Laborpersonal selbst (anhaftende Keime, Tröpfchenübertra-
gung der Mundflora) und den Umgang mit den Geräten und Kulturen. Wir empfehlen Mitarbeitertraining in
aseptischen Techniken, Laborsicherheit und Guter Laborpraxis (GLP).