Vorbereiten ipg-streifen – Hoefer IEF100 Benutzerhandbuch
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Vorbereiten IPG-Streifen
Immobilisierten pH-Gele (IPG) sind ultradünne Polyacrylamidgele
auf Kunststoff-Folien Unterstützung. Die Gele werden mit einem
pH-Gradienten kovalent in die Gelmatrix gebunden wird. Die Gele
sind stabil und reproduzierbar. Die Gele werden geliefert dehydriert
und sollte bei Temperaturen -20 °C oder darunter gelagert werden.
Die IPG-Streifen haben einen sauren (+) Ende und ein Basis (–) Ende.
2D-Gel Bilder werden typischerweise mit der sauren Seite, auf der
linken Seite gezeigt ist, und das ist die Orientierung der IPG-Streifen
in der IEF100. Die richtige Elektrode an jedem Ende eingesetzt
werden: anodisch (+) Elektrode mit der sauren Ende (links) und die
kathodische (–) Elektrode mit dem Basisende (rechts).
Die getrockneten Streifen rehydriert werden vor dem Lauf. Typisch-
erweise werden mehrere unterschiedliche Reagenzien in der Rehy-
dratationslösung enthalten, um die Solubilisierung der Proteine und
ermöglichen eine optimale isoelektrische Fokussierung. Rehydrierung
wird in der Regel bei Raumtemperatur oder 20 °C durchgeführt und
benötigt ein Minimum von 8 Stunden für eine gute Resorption des
reswelling Lösung. Es ist oft bequemer zu ermöglichen Rehydrierung
über Nacht auftreten. Während Rehydrierung werden die IPG-Streifen
in Mineralöl bedeckt, um den Verlust von Feuchtigkeit zu verhindern,
und zu verhindern, Harnstoff Kristallisation.
Die IPG-Streifen rehydratisiert Mithilfe der Rehydratisierung/Äqui-
librierung Tabletts mit dem IEF100 zugeführt. Protein Probe kann der
IPG-Streifen in diesem Schritt zugegeben werden. Die IPG-Streifen an
den IEF100 zum Fokussieren übertragen.