Sds äquilibrierungspuffer lösung – Hoefer IEF100 Benutzerhandbuch
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3. SDS Äquilibrierungspuffer Lösung
Diese Lösung wird nach IEF, und vor dem zweiten Dimension PAGE verwen-
det. Die IPG-Streifen werden in überschüssige Lösung eingetaucht, um
den pH-Wert des Streifens Puffer zu erhöhen, so dass es für PAGE und zur
Beschichtung der Proteine in der SDS gleichmäßig, so dass sie korrekt
migriert in der zweiten Dimension Gel.
Bereitet 200 ml
6 M Harnstoff, 75 mM Tris-HCl pH 8,8, 29,3% Glycerin, 2% SDS, 0,002%
Bromphenolblau
Endkonzentration
Betrag
Urea (FW 60,06)
6 M
72,1 g
1,5 Tris-HCl, pH 8,8 Stammlösung
75 mM
10,0 ml
Glycerin (87% w/w)
29,3% (v/v)
69 ml
SDS (FW 288,38)
2% (w/v)
4,0 g
Bromphenolblau
0,002% (w/v)
4 mg
VE-Wasser
bis 200 ml
Aliquot in 30 ml Aliquots und Lagerung bei -20 °C eingefroren werden.
24 cm IPG erfordern 5-10 ml pro Streifen pro Äquilibrierungsschritt.
Kürzeren Streifen können mit entsprechend weniger Volumen pro
Äquilibrierungsschritt.
Äquilibrierung Vorgehensweise
1
Auftauen zwei Aliquots der Äquilibrierung Lösung.
2
Fügen Sie 10 mg/ml DTT zu einer Lösung.
3
Legen Sie die IPG-Streifen in der Rehydratation/Äquilibrierung Fach.
4
Fügen Sie 6,5 ml Lösung für jeden Slot, die einen IPG Streifen.
5
Legen Sie auf Wippe für 10-15 Minuten.
Nach Äquilibrierung, verwerfen Sie den ersten Äquilibrierung Lösung in
angemessener Weise.
6
Mit 25 mg/ml Iodacetamid (IAA) mit dem zweiten Aliquot
Äquilibrierungslösung.
7
Fügen Sie 6,5 ml Lösung für jeden Slot, die einen IPG Streifen.
8
Setzen Sie auf Wippe für 10-15 Minuten.
Nach Äquilibrierung, entsorgen Sie die zweite Äquilibrierung Lösung in
angemessener Weise.
Nach der Äquilibrierung werden die IPG-Streifen auf der Oberseite der
zweiten Dimension Gel gelegt und abgedichtet in Stelle mit der
Agarose-Overlay.
Hinweis: IPG-Streifen sollte
äquilibriert kurz vor der zweiten
dimensin PAGE. Kein Gleichgewicht
der IPG-Streifen vor der Lagerung
bei -20 °C