Luminex xPONENT 3.1 - Handbuch (Seite 17)

5
Einführung
WARNUNG: Die Reagenzien können Natriumazid als Konservierungsmittel
enthalten. Natriumazid kann mit Blei- und Kupferleitungsrohren
reagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Es ist
ebenfalls hochtoxisch und entspricht nach dem Datenblatt zur
Materialsicherheit (MSDS) der Gesundheitsgefährdungsstufe 4.
Bei Entsorgung Abflussrohre mit reichlich kaltem Wasser spülen,
um die Bildung von Azidrückständen zu vermeiden. Konsultieren
Sie ebenfalls die Richtlinie „Safety Management No. CDC-22,
Decontamination of Laboratory Sink Drains to remove Azide salts“
(Centers for Disease Control, Atlanta, Georgia, 30. April 1976).
VORSICHT: Die Hüllenflüssigkeit und die Lösung, in der die Kügelchen
aufbewahrt werden, enthalten Proclin, das eine allergische
Reaktion auslösen kann. Verwenden Sie persönliche
Schutzausrüstung einschl. Laborhandschuhe und Schutzbrille.
Mikrokugelkonzentration
Die Konzentration der Mikrokugeln in einem Assay bestimmt die Systemgeschwindigkeit.
Bei der Bearbeitung eines xMAP-basierten Kits folgen Sie den Anweisungen auf der
Produktbeilage des Kits oder verwenden Sie das mitgelieferte Softwareprotokoll. Wir
empfehlen gewöhnlich, je nach Assay 2000 bis 5000 Mikrokugeln pro Ziel zu verwenden.
Wiederholungsmessungen mit xMAP-Mikrokugeln
In einem xMAP-Assay ist das Reportersignal das Ergebnis des Assays. Aufgrund
der geringen Größe der Mikrokugeln weist eine xMAP-Mikrokugelsuspension eine
Reaktionskinetik auf, die der Lösungsphase ähnelt. Das bedeutet, dass jeder Satz von
xMAP-Mikrokugeln, der für ein bestimmtes Assay verwendet wird, eine statistisch
gleichmäßige Verteilung der an der Oberfläche jeder Mikrokugel gebundenen
Reportermoleküle aufweist. Während der Datenerfassung werden zahlreiche Mikrokugeln
jedes Satzes analysiert. Dann wird die Medianstatistik für diesen Satz von der Software
errechnet. Je mehr Mikrokugeln eines Satzes gemessen werden, desto zuverlässiger ist
die jeweilige Messung. Bei der Bearbeitung eines xMAP-basierten Kits folgen Sie der
Produktbeilage des Kits oder verwenden Sie das mitgelieferte Softwareprotokoll.
Bestimmungs- und Reporter-Fluorochrome
Jeder xMAP-Mikrokugelsatz ist intern mit zwei Bestimmungsfarbstoffen gefärbt. Mit
dem Fluoreszenzsignal dieser Farbstoffe wird die Bestimmung jedes Mikrokugelsatzes
ermöglicht. Da jede Mikrokugel einzeln analysiert wird, selbst wenn die Sätze in einem
Multiplex-Assay vermischt werden, können sie trotzdem durch ihre Emissionssignale
unterschieden werden. Das Fluoreszenzsignal der an der Oberfläche jedes
Mikrokugelsatzes gebundenen Reportermoleküle wird gemessen und dient der
Bestimmung des Ergebnisses für jedes Assay in einem Multiplex. Und da jede Mikrokugel
einzeln analysiert wird, können also die Reportersignale für jeden Mikrokugelsatz genau
quantifiziert werden.