Probenvolumen, Probenverdünnung, Reagenzien – Luminex xPONENT 3.1 Benutzerhandbuch
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Luminex xPONENT 3.1 Softwarehandbuch
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In der folgenden Tabelle sind die akzeptablen Reporter-Fluorochrome und deren
Anregungs- und Emissionswellenlängen dargestellt.
Probenvolumen
Probenvolumen bzw. -größen reichen von 10 bis 200 µl. Stellen Sie sicher, dass nach der
Aspiration etwas Probe, etwa 25 µl über dem Probenvolumen, in der Kavität verbleibt.
Diese Menge kann je nach dem verwendeten Plattentyp variieren. Nach der Aufnahme
wäscht das Luminex-Analysegerät die Probenleitungen und spült etwa 165 µl der
Hüllenflüssigkeit zurück in die Kavität einer Mikrotiterplatte mit 96 Kavitäten. Stellen Sie
sicher, dass genug Platz vorhanden ist, um diese Menge zur Kavität hinzuzufügen, ohne
dass diese überläuft und andere Kavitäten kontaminiert.
Die Volumenbeschränkungen für das Assay können mithilfe der folgenden Formel
berechnet werden:
Gesamtkavitätsvolumen (µl) – Probenaufnahmevolumen (µl) + 165 (µl) <Maximales
Kavitätsvolumen (µl)
•
Gesamtkavitätsvolumen = das Anfangsprobenvolumen einer Kavität vor
Probenaufnahme. Das Kavitätsvolumen wird durch die Konsistenz des Kugelsatzes
bestimmt.
•
Probenaufnahmevolumen = das Aufnahmevolumen (im Protokoll als Probenvolumen
zu programmieren).
•
165 (µl) = das zurückgespülte Volumen, wie im Absatz oben angegeben.
•
Maximales Kavitätsvolumen der Platte = die maximale Volumenkapazität der Kavitäten
einer ausgewählten Mikrotiterplatte mit 96 Kavitäten.
Probenverdünnung
Verdünnen Sie konzentrierte biologische Proben wie Plasma oder Serum mindestens
im Verhältnis 1:5 mit Reagenzien als Teil der Assay-Einrichtung oder als letzten
Verdünnungsschritt. Bei der Bearbeitung eines xMAP-basierten Kits folgen Sie den
Anweisungen zur Verdünnung auf der Produktbeilage des Kits.
Reagenzien
Formulierte Reagenzien dürfen außer den xMAP-Mikrokugeln keine Partikel enthalten.
Weder xMAP-Kalibratoren noch Bestätigungsreagenzien dürfen verdünnt werden.
TABELLE 2. Reporterfluorochrom-Wellenlängen
R-Phykoerythrin
Alexa 532
Formelgewicht (Daltons)
240 000
470
Max. Absorption (nm)
480, 546, 565
531
Max. Extinktion (M-1cm-1)
1 960 000
83 800
Max. Emission (nm)
578
554
Quantenausbeute
0,82
0,8