Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Handbuch (Seite 14)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Bedienungsanleitung TA9217 DE-CE-Rev_D 08/04/2013
Qualitätskontrolle
Verwendung von Kontrollobjektträgern
Es wird empfohlen, bei jedem Testlauf einen Kontrollobjektträger Leica HER2 FISH Control Slide
zu verwenden, um die Leistungsfähigkeit des Assays und die Korrektheit der Signalauszählung
beurteilen zu können. Bei jeder Färbeserie im Leica BOND-MAX and BOND-III System und
jeder neuen Reagenziencharge sollten Kontrollobjektträger verwendet werden. Darüber hinaus
kann der einzelne Anwender sein eigenes Kontrollmaterial verwenden.
Beurteilen Sie die Qualität der Kontrollobjektträger und zählen Sie die Signale nach den
Anweisungen unter Signalbeurteilung und Auszählung. Die Kriterien für Objektträgerqualität
müssen erfüllt sein, und das Verhältnis von HER2:CEP17 sollte innerhalb des für akzeptable
Testergebnisse definierten Bereichs liegen. Tabelle 3 enthält die Akzeptanzkriterien für die Leica
HER2 FISH Control Slides.
Zelllinie Profil des Bond
Oracle HER2 IHC
System HER2
Rezeptor dichte
pro Zelle* Leica HER2 FISH System - 30 Test
HER2:CEP17 Akzeptanzkriterien
SKBr-3 3+ 4,3 x 10 5 HER2-Amplifikation wird beobachtet
MDA-MB-453 2+ 1,4 x 10 5
HER2/CEP17 Gen-Verhältnis sollte zwischen
1,5 und 2,5 liegen
MDA-MB-175 1+ 6,3 x 10 4 HER2-Amplifikation wird nicht beobachtet
MDA-MB-231 0 9,3 x 10 3 HER2-Amplifikation wird nicht beobachtet
*Analyse der HER2-Rezeptordichte mithilfe von Durchflusszytometrie.
Tabelle 3: Interpretation der Leica HER2 FISH Control Slides.
Wenn bei den Kontrollobjektträgern ein Fehler vorliegt, sollten für diesen Fall keine FISH-
Ergebnisse dokumentiert werden. Wenn die Kontrollobjektträger nicht die Akzeptanzkriterien
erfüllen, hat das Leica HER2 FISH System - 30 Test möglicherweise keine akzeptable Leistung
erbracht. In diesem Fall ist eine Wiederholung des Tests mit neuen Kontrollobjektträgern und
Patientenproben-Objektträgern erforderlich. Wenn die Ergebnisse außerhalb des angegebenen
Bereichs liegen, aber die Kontrollobjektträger die Akzeptanzkriterien für Qualität erfüllen, kann
ein erneutes Screening desselben Objektträgers angebracht sein, da möglicherweise die
Auszählung nicht korrekt durchgeführt wurde. Im Falle eines Hybridisierungsfehlers bei der
Probe oder den Kontrollobjektträgern siehe Fehlerbehebungshinweise in Tabelle 6.
Wenn bei klinischen Proben die Interpretation des Hybridisierungssignals schwierig ist und
nicht genügend Probenmaterial für einen erneuten Assay vorhanden ist, ist der Test nicht
aussagekräftig. Wenn nicht genügend Zellen für die Analyse vorhanden sind, ist der Test nicht
aussagekräftig.
Die Patientenproben sind nach Standardlaborverfahren zu kontrollieren.
Signalqualität und
Auszählungsergebnisse sind auf einem geeigneten Formular zu dokumentieren.
Einschränkungen
A. Allgemeine Einschränkungen
FISH ist eine Technik, die eine spezielle Schulung in Bezug auf alle Aspekte des Verfahrens
(einschließlich Auswahl geeigneter Reagenzien, Gewebe, Fixier- und Aufbereitungsmethoden
sowie Vorbereitung der Objektträger) sowie in Bezug auf die Interpretation erfordert. Die
Gewebefärbung setzt eine sachgemäße Vorbereitung, Fixierung und Infiltration des Gewebes
voraus. Unsachgemäßes Fixieren, Gefrieren, Auftauen, Waschen, Trocknen, Erwärmen
oder Schneiden oder Verunreinigung mit anderen Geweben oder Flüssigkeiten kann zu
morphologischen Artefakten, Zerfall von Nukleinsäuren, Hintergrundfluoreszenz oder falsch