Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Handbuch (Seite 7)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Bedienungsanleitung TA9217 DE-CE-Rev_D 08/04/2013
• Trockenofen (der eine Temperatur von 60 °C halten kann)
• Fluoreszenzmikroskop (60–100x Objektiv) mit geeigneter Lichtquelle. Es empfiehlt sich,
die Einsatzdauer der Lampe zu dokumentieren und die Lampe auszutauschen, bevor sie
die Nennlebensdauer überschritten hat. Außerdem ist auf eine korrekte Ausrichtung der
Lampe zu achten.
• Geeigneter Fluoreszenzfiltersatz (SpectrumOrange ™ – Anregungsmaximum bei 559 nm,
Emissionsmaximum bei 588 nm, SpectrumGreen ™ – Anregungsmaximum bei 497 nm,
Emissionsmaximum bei 524 nm und DAPI – Anregungsmaximum bei 367 nm,
Emissionsmaximum bei 452 nm). Zu den meisten Mikroskopmodellen sind für den Einsatz mit
dem Leica HER2 FISH System - 30 Test optimierte Multiband-Fluoreszenzmikroskopfiltersätze
verfügbar. Folgende Filtersätze werden für das Leica HER2 FISH System - 30 Test empfohlen:
DAPI/9-Orange Dual Bandpass, DAPI/Green Dual Bandpass, Green/Orange(V.2) Dual
Bandpass sowie DAPI/Green/Orange (V.2) Triple Bandpass.
C. Methodik
• Die Anwendung dieser Methode setzt eine ausreichende Schulung in Bezug auf die
automatisierte in-situ-Fluoreszenz-Technik voraus.
• Jeder mit LSI HER2/CEP17 Dual Probe gefärbte Testschnitt ermöglicht die Same-Cell-
Analyse von HER2-Signalen und Zentromersignalen des Chromosoms 17. Anhand des
Verhältnisses von HER2- zu Chromosom-17-Signalen kann der Probe ein quantitativer
Wert zugeordnet werden, woraus sich ein negatives Ergebnis (keine Amplifikation) oder
positives Ergebnis (Amplifikation) ableiten lässt. Zweideutige (grenzwertige) Ergebnisse
(zwischen 1,8 und 2,2) sind mit Vorsicht zu interpretieren. In diesem Fällen sollten
weitere 20 Kerne ausgezählt und das Verhältnis neu berechnet werden.
D. BOND Enzym-Vorbehandlung
Vor dem Färben ist das im Lieferumfang enthaltene Leica BOND Enzyme Concentrate 2 unter
Verwendung des Leica BOND Enzyme Diluent in einem der Leica BOND Open Containers
im Verhältnis 1:300 zu verdünnen. Um beispielsweise 10 Objektträger zu färben, sind 3 ml
Enzymlösung herzustellen, indem 10 µl Leica BOND Enzyme Concentrate 2 in 2990 µl
Leica BOND Enzyme Diluent verdünnt werden. Es wird empfohlen, das Enzym vor jedem
Färbelauf frisch herzustellen und pro Lauf ein Mindestvolumen von 900 µl zu verwenden.
E. Standard-Färbeprotokoll
Es wird empfohlen, das Leica HER2 FISH System - 30 Test mit dem in Tabelle 2
dargestellten Standard-Färbeprotokoll anzuwenden.
Protokolltyp Protokollname
Färbung *FISH Protocol A
Vorbereitung *Dewax
HIER *HIER 25 min with ER1 (97)
Enzym *Enzyme 5 for 25 min
Denaturierung *D10
Hybridisierung *ISH Hybridization (12Hr)
Tabelle 2: Standard-Leica HER2 FISH System - 30 Test Staining Protocol