Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Handbuch (Seite 21)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Bedienungsanleitung TA9217 DE-CE-Rev_D 08/04/2013
Zuverlässigkeit des Assays
Es wurden Zuverlässigkeitsstudien mit dem Leica BOND-MAX and BOND-III System
durchgeführt, um den Toleranzbereich des Assays in Bezug auf Hitzedemaskierungsdauer und
-temperatur; Enzymdemaskierungsdauer, -temperatur und -konzentration; Denaturierungsdauer
und -temperatur; Hybridisierungsdauer und -temperatur sowie Dauer und Temperatur
des stringenten Waschens zu ermitteln. Zuverlässigkeitsstudien unter Verwendung des
Standardprotokolls für das Leica BOND-MAX and BOND-III System wurden auch außerhalb
der in der FDA/ORA-Richtlinie ORA LAB5.3 Rev1.7 in Bezug auf Temperatur und Feuchtigkeit
definierten Grenzwerte durchgeführt.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus war bei Erhöhung oder Senkung der
Standardtemperatur in den einzelnen wärmeabhängigen Schritten um 4 °C gegenüber dem
Standardprotokoll des Leica HER2 FISH System - 30 Test zu beobachten. Die höchsten
Qualitätswerte wurden bei den Standardtemperaturen erzielt, und diese Temperaturen
werden empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica HER2
FISH System - 30 Test wurde beobachtet, wenn wärmeinduzierte Epitopdemaskierung
(HIER) 20 Minuten und 30 Minuten bei 97 °C mit Leica BOND ER1 Lösung durchgeführt
wurde. Die höchsten Qualitätswerte wurden bei der Standarddauer von 25 Minuten erzielt,
und diese Inkubationsdauer wird empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica HER2
FISH System - 30 Test wurde beobachtet, wenn enzyminduzierte Epitopdemaskierung (EIER)
15 Minuten und 35 Minuten bei 37 °C durchgeführt wurde. Die höchsten Qualitätswerte
wurden bei der Standarddauer von 25 Minuten erzielt, und diese Inkubationsdauer wird
empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus wurde beobachtet, wenn die enzyminduzierte
Epitopdemaskierung (EIER) mit einem Verdünnungsverhältnis (Enzymkonzentrat zu
Verdünnungsmittel) von 1:200 und 1:500 mit dem Standardprotokoll Leica HER2 FISH
System - 30 Test protocol durchgeführt wurde. Die höchsten Qualitätswerte wurden bei der
Standardkonzentration von 1:300 erzielt, und dieses Verdünnungsverhältnis wird empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica
HER2 FISH System - 30 Test wurde beobachtet, wenn mit einer Denaturierungsdauer von
5 Minuten und 15 Minuten gearbeitet wurde. Die höchsten Qualitätswerte wurden bei der
Standarddauer von 10 Minuten erzielt, und diese Denaturierungsdauer wird empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica
HER2 FISH System - 30 Test wurde beobachtet, wenn mit einer Hybridisierungsdauer von
9 Stunden und 15 Stunden gearbeitet wurde. Die höchsten Qualitätswerte wurden bei der
Standarddauer von 12 Stunden erzielt, und diese Hybridisierungsdauer wird empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica HER2
FISH System - 30 Test wurde beobachtet, wenn mit einer Waschdauer nach der Hybridisierung
von 2, 5 und 7 Minuten gearbeitet wurde. Die höchsten Qualitätswerte wurden bei der
Standardwaschdauer von 4 Minuten erzielt, und diese Waschdauer nach der Hybridisierung
wird empfohlen.
• Keine Änderung des Amplifikationsstatus gegenüber dem Standardprotokoll des Leica
HER2 FISH System - 30 Test bei Umgebungsbedingungen wurde beobachtet, wenn das
Leica HER2 FISH System - 30 Test bei 28 °C und 30 % relativer Luftfeuchtigkeit sowie bei
16 °C und 80 % relativer Luftfeuchtigkeit angewendet wurde.
Assay-Bedingungen außerhalb der bei den Zuverlässigkeitsstudien ermittelten empfohlenen
Parameter wurden nicht validiert. Durch die Verwendung anderer Testparameter verliert der
Assay möglicherweise seine Gültigkeit.
Im vorausgehenden Text werden die Testbedingungen sowie die Ergebnisse der Studie
beschrieben. Dabei ist zu beachten, dass nicht alle möglichen Konstellationen von Leica
getestet wurden und dass nicht empfohlen wird, bei allen Bedingungen von den Standardwerten
abzuweichen. Das Standardprotokoll Leica HER2 FISH Staining Protocol ist in Tabelle 2
dargestellt.