Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Handbuch (Seite 15)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Bedienungsanleitung TA9217 DE-CE-Rev_D 08/04/2013
negativen Ergebnissen führen. Uneinheitliche Ergebnisse können auf Variationen bei Fixierung
oder Einbettmethoden oder auf inhärente Unregelmäßigkeiten innerhalb des Gewebes
zurückzuführen sein (21). Auch übermäßige oder unvollständige Gegenfärbung kann eine
korrekte Interpretation der Ergebnisse erschweren.
Eine unspezifische Färbung als Folge einer nicht gebundenen Sonde hat ein gestreutes,
granuläres Aussehen und tritt an der erwarteten Hybridisierungsstelle oder entfernt davon
auf. Verwenden Sie zur Interpretation der Färbeergebnisse intakte Zellen. Nekrotische
oder degenerierte Zellen weisen oft eine unspezifische Färbung auf (22). Unerwartete
FISH-Färbungen oder Färbevariationen können das Ergebnis von Veränderungen der
Expressionsgrade der codierenden Gene sein. Jede Veränderung der erwarteten Färbemuster
sollte im Zusammenhang mit allen anderen diagnostischen Untersuchungen interpretiert
werden. Die Interpretation der Färbungen sollte durch morphologische Untersuchungen und die
Verwendung geeigneter Kontrollmaterialien ergänzt und im Kontext der klinischen Anamnese
des Patienten sowie anderer diagnostischer Untersuchungen durch einen qualifizierten
Pathologen beurteilt werden.
Der Assay (d. h. die Bewertung der Eignung der Kontrollmaterialien) und die Interpretation von
Färbungen bzw. des Fehlens dieser Färbungen sind in einem entsprechend qualifizierten Labor
unter der Leitung eines entsprechend qualifizierten und erfahrenen Pathologen durchzuführen,
der für die Gesamtbeurteilung des In-situ-Hybridisierungs-Assays und seine Interpretation
verantwortlich ist. Falsch positive Ergebnisse der FISH-Analyse können auf Kreuzreaktivität der
Sonde auf andere Nukleinsäuresequenzen und/oder unspezifische Bindung zurückzuführen
sein. Es müssen geeignete Kontrollen angewendet und dokumentiert werden, und bei den Tests
sind alle relevanten Ablaufdaten zu beachten.
Technische und interpretationsbezogene Variationen können auch beobachtet werden, wenn
FISH auf Zelllinien-Derivate angewendet wird (23).
B. Produktspezifische Einschränkungen
Dieses Produkt ist nicht für den Einsatz bei anderen diagnostischen Assays auf DNA-Basis
vorgesehen.
Ersetzen Sie die im Leica HER2 FISH System - 30 Test enthaltenen Reagenzien nicht durch
andere Komponenten (von Leica Biosystems oder anderen Herstellern). Dadurch würde der
Assay seine Aussagekraft verlieren. Der Anwender muss Abweichungen von den empfohlenen
Verfahren selbst validieren.
Es wird empfohlen, für den Assay nur mit formalinhaltigen Fixiermitteln behandelte Gewebe
zu verwenden. Durch Verwendung anderer Fixiermittel könnte der Assay seine Gültigkeit
verlieren.
Mit Gewebepräparaten, deren Dicke außerhalb des empfohlenen Bereichs liegt, wurde das
System nicht getestet. Durch die Verwendung von Schnitten anderer Dicke verliert der Assay
möglicherweise seine Gültigkeit.
Klinische Konkordanz zwischen Leica HER2 FISH System - 30 Test
und Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit
Bei dieser Studie wurde die Eignung des Leica HER2 FISH System - 30 Test als Hilfe bei
der Entscheidung über eine Therapie mit Herceptin (trastuzumab) untersucht. Dabei sollte die
Konkordanz zwischen dem Leica HER2 FISH System - 30 Test und einem bereits zugelassenen
Diagnostikum, dem Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit, das als ‘Goldstandard’
für diesen Assay gilt, ermittelt werden. Das Akzeptanzkriterium für den Test bestand darin,
dass die Untergrenze des einseitigen 95%-Konfidenzintervalls zwischen dem Leica HER2
FISH System - 30 Test und dem manuellen Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe
Kit, zwischen positiven (amplifizierten) und negativen (nicht amplifizierten) formalinfixierten, in
Paraffin eingebetteten (FFPE) Fällen von invasivem Brustkrebs über 90 % liegt.
Die Studie wurde als Blind-Evaluierung klinischer invasiver Brustkrebsproben an drei Standorten