Eppendorf BioPhotometer plus - Handbuch (Seite 23)

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5 Bedienung
BioPhotometer plus — Bedienungsanleitung
5.8.3 Einbaurate "FOI"
Die FOI ist ein Maß für die Konzentration des Farbstoffs relativ zur Konzentration der
Nukleinsäure. Er wird nicht für Proteinmethoden angeboten. Für die Berechnung der FOI können
Sie in den Methodenparametern zwischen 2 Einheiten auswählen:
• "MOLEKÜLE DYE / kb": Farbstoffmoleküle pro 1000 Nukleotide.
• "pmol / μg DNA": pmol Farbstoff pro μg Nukleinsäure.
Die Formeln für die Berechnung des FOI finden Sie separat
(siehe Berechnung der FOI auf S. 88).
5.8.4 Korrekturfaktoren
Neben der beschriebenen Möglichkeit der Trübungskorrektur (Parameter "KORREKTUR E
340
")
(siehe Nukleinsäuren auf S. 63) kann bei den "DYE-Methoden" der Einfluss des Farbstoffs auf
die Messung der Nukleinsäure bzw. des Proteins korrigiert werden. Sofern bekannt ist, in
welchem Ausmaß der Farbstoff Licht auch bei den Messwellenlängen des Biomoleküls (260 und
280 nm) absorbiert, kann im Parameter "KORREKTUR E
550 (bzw. 650)
" eine Korrektur
vorgenommen werden. Wenn Sie diesen Parameter aktivieren, können Sie für 260 und 280 nm
Korrekturfaktoren eingeben. Für Cy 3 sind z.B. vorprogrammiert:
• 0.04 für "KORR.E
550
: F
260
"
• 0.05 für "KORR.E
550
: F
280
"
Die Verwendung dieser Faktoren für die Konzentrations- und Ratio-Berechnung des Biomoleküls
ist separat beschrieben (siehe Korrektur E
550/650
auf S. 89).
5.8.5 Messablauf und Ergebnisanzeige
Nach dem Methodenaufruf sehen Sie folgende Anzeige (Beispiel: "DYE 550 - ssDNA"):
Oben: Methodenname und in den Parametern ausgewählte
Küvette.
Mitte: Programmierte Werte für die Berechnung der DNA-
und Farbstoffkonzentrationen: Faktor für ssDNA sowie
Extinktionskoeffizient für den Farbstoff. Zusätzlich wird der
aus dem Extinktionskoeffizienten errechnete Faktor,
bezogen auf 10 mm Küvettenschichtdicke, angezeigt.
Unten: Messtaste für die nächste Messung.
 Führen Sie eine Leerwertmessung durch.
 Führen Sie eine Probenmessung durch.
Oben: Methodenname und Probennummer
Mitte: Ergebnis für DNA und Farbstoff.
Unten: Ergebnis für die Einbaurate.
DE
Bedienun
gsanleitun
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