Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Handbuch (Seite 5)

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Deutsch
Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Instructions for Use TA9145 DE-CE-Rev_E 18/06/2013
Deutsch
Polymer, 22.5 mL
Poly-HRP-Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (<25 μg/mL) mit 10 % (v/v)
tierischem Serum in TRIS-gepufferter physiologischer Kochsalzlösung
und 0,09 % ProClin
TM
950.
DAB Part 1, 2.25 mL
Enthält 66 mM 3,3’-Diaminobenzidintetrahydrochlorid in
Stabilisatorlösung.
DAB Part B (x2),
22.5 mL
Enthält ≤0,1 % (v/v) Wasserstoffperoxid.
Hematoxylin, 22.5 mL Enthält <0,1 % Hämatoxylin
Tabelle 1. Komponenten des Bond Oracle HER2 IHC System
Gebrauchsanweisungen
Alle im Lieferumfang enthaltenen Reagenzien sind speziell für den Einsatz bei diesem
Assay konzipiert, und die Chargennummern sind für jedes einzelne Bond Oracle HER2 IHC
System spezifisch. Um die korrekte Durchführung des Assays zu gewährleisten, dürfen keine
Reagenzien ausgetauscht werden.
Lagerung und Stabilität
Bei 2–8 °C lagern. Nicht einfrieren. Unmittelbar nach dem Gebrauch erneut bei 2–8 °C
lagern. Durch jede Abweichung von diesen Bedingungen verliert der Assay seine Gültigkeit.
Es ist darauf zu achten, dass das Verfallsdatum des verwendeten Bond Oracle HER2 IHC
System nicht überschritten wird. Folgende Anzeichen deuten auf eine Verunreinigung und/oder
Instabilität des Bond Oracle HER2 IHC System hin: Trübe Lösungen, Geruchsentwicklung und
das Vorhandensein von Niederschlägen. Andere Lagerbedingungen als die oben angegebenen
müssen vom Anwender selbst getestet werden.
Probenvorbereitung
Alle Proben müssen so vorbereitet werden, dass das Gewebe für die immunhistochemische
Färbung erhalten bleibt. Für alle Proben (12) sind die Standardmethoden der Gewebeaufbereitung
anzuwenden.
Das Fixieren der Gewebe in formalinhaltigem Fixiermittel sowie die Routineverarbeitung und
Einbettung in Paraffin wird empfohlen. Beispielsweise sollten Resektionsproben in Blöcke von
3-4 mm Dicke geschnitten und 18–24 Stunden in 10 % neutral gepuffertem Formalin eingelegt
werden Anschließend sollten die Gewebe in abgestuft konzentriertem Alkohol dehydriert, mit
Xylen geklärt und anschließend in geschmolzenes Paraffinwachs eingebettet werden, dessen
Temperatur nicht über 60 °C liegen sollte. Gewebeproben sollten mit einer Dicke von 3–5 µm
geschnitten werden.
Die für die Bestimmung des Onkoproteins HER2 und die Tumordiagnose erforderlichen
Objektträger sind gleichzeitig vorzubereiten. Zur Erhaltung der Antigenität sollten auf Objektträger
(Leica BOND Plus Slides – Produktcode S21.2113) aufgebrachte Gewebepräparate bei
Lagerung bei Raumtemperatur (20–25 °C) innerhalb von 4-6 Wochen nach der Schnitterstellung
gefärbt werden. Es wird empfohlen, die Objektträger nach der Schnitterstellung 12–18 Stunden
(über Nacht) bei 37 °C zu inkubieren. Schnitte, die eine stärkere Haftung erfordern, können eine
weitere Stunde bei 60 °C inkubiert werden.
In den USA schreibt der Clinical Laboratory Improvement Act aus dem Jahr 1988 unter
42 CFR 493.1259(b) vor, dass "das Labor gefärbte Objektträger mindestens zehn Jahre und
Probenblöcke mindestens zwei Jahre ab dem Datum der Untersuchung aufbewahren muss".