BINDER CB 60 - Handbuch (Seite 101)

CB (E6) 09/2013 Seite 101/143
16. Referenzmessungen
Referenzmessungen für Temperatur, CO
2
und O
2
(Gerät mit O
2
Regelung) können über eine Silikon-
Messdurchführung (N) in der inneren Glastür durchgeführt werden. Referenzmessungen der Temperatur
werden grundsätzlich im thermisch stabilen Zustand und bei geschlossenen Gerätetüren durchgeführt.
16.1 CO
2
Referenzmessung
Üblicherweise wünschen Anwender die Durchführung von Referenzmessung zwischen den jährlichen
Wartungsintervallen. Hierfür eignen sich prinzipiell 3 Möglichkeiten um die CO
2
Konzentration im Innern
des CO
2
-Inkubators zu messen. Diese werden in Kap. 16.1.1 bis 16.1.3 beschrieben.
16.1.1 Messung der CO
2
Konzentration indirekt über den pH-Wert der Zellkultur
Die CO
2
Konzentration im Innern des CO
2
-Inkubators kann indirekt über den pH-Wert des Nährmediums
bestimmt werden. Dies ist eine einfache Methode, um die CO
2
Konzentration ohne spezielle Ausstattung
zu prüfen. Man benötigt lediglich einen genauen pH-Indikator oder eine pH-Messelektrode, was zur Stan-
dardausstattung in Zellkulturlabors gehört.
Diese Methode basiert auf dem Säure-Base Gleichgewicht des Puffersystems im Nährmedium. Handels-
übliche Nährmedien sind üblicherweise mit NaHCO
3
gepuffert. Über den gemessenen pH-Wert im Medi-
um lässt sich auf die CO
2
Konzentration schließen. Nach Abbildung 24 können Sie die Beziehung zwi-
schen gemessenem pH-Wert im NaHCO
3
gepufferten Medium und der abzuleitenden CO
2
Konzentration
in Vol.-% ablesen.
Solche Prüfsysteme sind nicht zur Kalibrierung der BINDER Sensoren geeignet.
Empfohlenes Vorgehen:
•
Probe für einen 1/2 Tag unter den gleichen Bedingungen wie die Zellkulturen in einer Zellkulturflasche
oder in einem 50 ml Falcon-Röhrchen mit offenem Deckel inkubieren.
• Nach der Begasung Probe aus dem CO
2
-Inkubator entnehmen und den pH-Wert innerhalb von 5
Minuten mit einer Glaselektrode messen.
Während der Messung sollte das Medium möglichst keinen Oberflächenkontakt zur Umgebung haben,
so dass das CO
2
nur wenig heraus diffundieren kann. Messungen die nach einer Zeit von 5 Minuten
durchgeführt werden können keine hinreichende Messergebnisse mehr garantieren.
Zur Messung können alternativ auch pH-Messstreifen benutzt werden (pH-Bereich 6 bis 8, nicht-blutend).
4
6
8
10
12
14
16
18
2
3,70 g/l NaHCO
3
2,20 g/l NaHCO
3
0,85 g/l NaHCO
3
6.8 7.0 7.2 7.4 7.6
pH-Wert
Vol.% CO 2
0,35 g/l NaHCO
3
1,20 g/l NaHCO
3
Handelsnamen von Kulturmedien:
DMEM
BME
MEM
Medium 199
Mc Coy
F10
F12
NaHCO
3
[g/l]
3,70
2,20
2,20
2,20
2,20
1,20
1,20
Abbildung 24: pH-Wert handelsüblicher NaHCO
3
gepufferter Medien als Funktion der CO
2
Konzentration
Beispiel: Wenn ein pH von 7,2 in einem Medium gemessen wird, das mit 2,20 g NaHCO
3
pro Liter gepuf-
fert wird, beträgt die CO
2
Konzentration in der Umgebung des Mediums 8 Vol.-%.